1.血液采集與預(yù)處理:
選擇健康的供血者,按照嚴(yán)格的采血程序和規(guī)范進(jìn)行血液采集,確保血液樣本的質(zhì)量。采集到的血液通常會(huì)先經(jīng)過抗凝處理,以防止血液凝固。常用的抗凝劑有肝素、檸檬酸鈉等。
對(duì)采集的血液進(jìn)行初步的離心處理,去除血液中的血細(xì)胞、血小板等有形成分,得到血漿。這一步的離心速度和時(shí)間需要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求和設(shè)備性能來確定,一般在較低轉(zhuǎn)速下進(jìn)行短時(shí)間離心,以盡可能保留血漿中的生物活性成分。
2.深度凈化與去雜質(zhì):
吸附劑吸附:將得到的血漿調(diào)整 pH 至最佳吸附范圍(一般為 pH3.0 - 6.0),然后加入具有高比表面積的吸附劑,如蒙脫石、活性炭等。這些吸附劑可以有效地吸附血漿中的雜質(zhì)、內(nèi)源性化合物以及可能存在的目標(biāo)檢測(cè)物殘留。在吸附過程中,需要不斷地震蕩或攪拌,以保證吸附劑與血漿充分接觸,提高吸附效率。吸附完成后,通過離心分離去除吸附劑,收集上清液。
超濾洗脫:將吸附后的上清液轉(zhuǎn)移至超濾管中,加入具有抗氧化作用或還原作用的洗脫液,如二硫蘇糖醇、抗壞血酸等的水溶液或生理鹽水溶液。進(jìn)行超濾洗脫,通過超濾膜的過濾作用,進(jìn)一步去除血漿中的小分子雜質(zhì)和殘留的吸附劑。超濾洗脫的過程可以根據(jù)需要重復(fù)多次,以確保血漿的純凈度。
3.質(zhì)量檢測(cè)與評(píng)估:
對(duì)制備得到的空白血漿進(jìn)行一系列的質(zhì)量檢測(cè),包括檢測(cè)其 pH 值、滲透壓、蛋白質(zhì)含量、離子濃度等指標(biāo),確保空白型血漿的理化性質(zhì)符合實(shí)驗(yàn)要求。同時(shí),還需要對(duì)空白型血漿進(jìn)行目標(biāo)檢測(cè)物的檢測(cè),如維生素、氨基酸、神經(jīng)遞質(zhì)、藥物、激素等,以確定其殘留量是否在可接受的范圍內(nèi)。如果空白型血漿中目標(biāo)檢測(cè)物的殘留量過高,可能需要重新進(jìn)行凈化處理或更換血漿來源。
4.分裝與儲(chǔ)存:
經(jīng)過質(zhì)量檢測(cè)合格的空白血漿,需要在無菌條件下進(jìn)行分裝,避免污染。分裝后的空白型血漿應(yīng)盡快儲(chǔ)存于合適的條件下,一般建議在 - 20℃以下冷凍保存,以防止血漿中的生物活性成分降解。在儲(chǔ)存過程中,要定期對(duì)血漿進(jìn)行檢查,確保其質(zhì)量穩(wěn)定。